1. Doel: Deze procedure heeft tot doel een gestandaardiseerde procedure te bieden voor aseptische handelingen en de bescherming van steriele ruimten.
2. Toepassingsgebied: biologisch testlaboratorium
3. Verantwoordelijke persoon: QC-supervisor/tester
4. Definitie: Geen
5. Veiligheidsmaatregelen
Voer strikt aseptische handelingen uit om microbiële besmetting te voorkomen; medewerkers dienen de UV-lamp uit te schakelen voordat ze de steriele ruimte betreden.
6. Procedures
6.1. De steriele ruimte moet zijn uitgerust met een steriele operatiekamer en een bufferruimte. De reinheid van de steriele operatiekamer moet klasse 10000 bereiken. De binnentemperatuur moet worden gehandhaafd op 20-24 °C en de luchtvochtigheid op 45-60%. De reinheid van de clean bench moet klasse 100 bereiken.
6.2. De steriele ruimte moet schoon worden gehouden en het is ten strengste verboden om vuil op te hopen om besmetting te voorkomen.
6.3. Voorkom ten strengste besmetting van alle sterilisatieapparatuur en kweekmedia. Besmette materialen en media moeten niet langer worden gebruikt.
6.4. De steriele ruimte moet voorzien zijn van desinfectiemiddelen met een werkzame concentratie, zoals een 5% cresoloplossing, 70% alcohol, een 0,1% chloormethionineoplossing, enz.
6.5. De steriele ruimte moet regelmatig worden gesteriliseerd en gereinigd met een geschikt desinfectiemiddel om te garanderen dat de reinheid van de steriele ruimte aan de eisen voldoet.
6.6. Alle instrumenten, instrumenten, serviesgoed en andere voorwerpen die in de steriele ruimte gebracht moeten worden, dienen luchtdicht verpakt en op de juiste wijze gesteriliseerd te worden.
6.7. Voordat medewerkers de steriele ruimte betreden, moeten ze hun handen wassen met zeep of desinfectiemiddel en zich vervolgens in de bufferruimte omkleden in speciale werkkleding, schoenen, mutsen, maskers en handschoenen (of hun handen nogmaals desinfecteren met 70% ethanol) voordat ze de steriele ruimte betreden. Voer handelingen uit in de bacteriële kamer.
6.8. Voordat de steriele ruimte in gebruik wordt genomen, moet de ultravioletlamp in de steriele ruimte gedurende meer dan 30 minuten worden ingeschakeld voor bestraling en sterilisatie, en moet de clean bench tegelijkertijd worden ingeschakeld voor luchtcirculatie. Na afloop van de procedure moet de steriele ruimte tijdig worden gereinigd en vervolgens gedurende 20 minuten worden gesteriliseerd met ultraviolet licht.
6.9. Vóór de inspectie moet de buitenverpakking van het testmonster intact blijven en mag deze niet worden geopend om besmetting te voorkomen. Desinfecteer vóór de inspectie het buitenoppervlak met wattenbolletjes gedrenkt in 70% alcohol.
6.10. Tijdens elke handeling moet een negatieve controle worden uitgevoerd om de betrouwbaarheid van de aseptische werking te controleren.
6.11. Bij het opzuigen van bacteriële vloeistof moet u een zuigbal gebruiken. Raak het rietje niet rechtstreeks met uw mond aan.
6.12. De entnaald moet vóór en na elk gebruik door middel van een vlam worden gesteriliseerd. Na afkoeling kan de kweek worden geënt.
6.13. Rietjes, reageerbuizen, petrischalen en andere gebruiksvoorwerpen die bacteriële vloeistof bevatten, moeten worden geweekt in een sterilisatie-emmer met een 5% Lysol-oplossing voor desinfectie, en na 24 uur eruit worden gehaald en afgespoeld.
6.14. Als er bacteriële vloeistof op een tafel of vloer is gemorst, moet u onmiddellijk een 5% carbolzuuroplossing of 3% Lysol op het besmette gebied gieten en dit minimaal 30 minuten laten inwerken alvorens het te behandelen. Werkkleding en petten die besmet zijn met bacteriële vloeistof moeten onmiddellijk worden uitgetrokken en na sterilisatie met hogedrukstoom worden gewassen.
6.15. Alle voorwerpen die levende bacteriën bevatten, moeten worden gedesinfecteerd voordat ze onder de kraan worden afgespoeld. Het is ten strengste verboden het riool te vervuilen.
6.16. Het aantal kolonies in de steriele ruimte moet maandelijks worden gecontroleerd. Neem, met de clean bench open, een aantal steriele petrischalen met een binnendiameter van 90 mm en injecteer aseptisch ongeveer 15 ml voedingsagar-kweekmedium dat is gesmolten en afgekoeld tot ongeveer 45 °C. Plaats de petrischalen na stolling ondersteboven in een incubator van 30 tot 35 °C en incubeer ze gedurende 48 uur. Na het controleren van de steriliteit, neem 3 tot 5 petrischalen en plaats deze links, in het midden en rechts van de werkpositie. Open de deksels en laat de petrischalen 30 minuten staan. Plaats ze vervolgens ondersteboven in een incubator van 30 tot 35 °C gedurende 48 uur en haal ze eruit voor onderzoek. Het gemiddelde aantal diverse bacteriën op een petrischaal in een cleanroom van klasse 100 mag niet meer dan 1 kolonie bedragen, en het gemiddelde aantal in een cleanroom van klasse 10000 mag niet meer dan 3 kolonies bedragen. Als de limiet wordt overschreden, moet de steriele ruimte grondig worden gedesinfecteerd totdat herhaalde inspecties aan de eisen voldoen.
7. Raadpleeg het hoofdstuk (Steriliteitsinspectiemethode) in "Hygiënische inspectiemethoden voor geneesmiddelen" en "Chinese standaardwerkwijzen voor geneesmiddeleninspectie".
8. Distributieafdeling: Afdeling Kwaliteitsmanagement
Technische richtlijnen voor cleanrooms:
Na het verkrijgen van een steriele omgeving en steriele materialen, moeten we deze steriele toestand handhaven om een specifiek, bekend micro-organisme te bestuderen of de functies ervan te benutten. Anders kunnen diverse micro-organismen van buitenaf zich gemakkelijk mengen. Dit verschijnsel, waarbij ongewenste micro-organismen van buitenaf zich mengen, wordt in de microbiologie 'bacteriële contaminatie' genoemd. Het voorkomen van contaminatie is een cruciale techniek in microbiologisch onderzoek. Volledige sterilisatie enerzijds en het voorkomen van contaminatie anderzijds zijn twee aspecten van de aseptische techniek. Daarnaast moeten we voorkomen dat de te bestuderen micro-organismen, met name pathogene micro-organismen of genetisch gemodificeerde micro-organismen die niet in de natuur voorkomen, uit onze experimentele containers ontsnappen naar de buitenomgeving. Hiervoor bestaan in de microbiologie diverse maatregelen.
Een steriele ruimte is meestal een kleine, speciaal ingerichte ruimte in een microbiologisch laboratorium. Deze kan worden gebouwd met platen en glas. De oppervlakte mag niet te groot zijn, ongeveer 4-5 vierkante meter, en de hoogte moet ongeveer 2,5 meter zijn. Buiten de steriele ruimte moet een bufferruimte worden ingericht. De deur van de bufferruimte en de deur van de steriele ruimte mogen niet in dezelfde richting wijzen om te voorkomen dat er bacteriën via de luchtstroom naar binnen worden gebracht. Zowel de steriele ruimte als de bufferruimte moeten luchtdicht zijn. De ventilatieapparatuur binnenin moet voorzien zijn van luchtfilters. De vloer en wanden van de steriele ruimte moeten glad zijn, zodat er geen vuil aan blijft kleven en ze gemakkelijk schoon te maken zijn. Het werkoppervlak moet vlak zijn. Zowel de steriele ruimte als de bufferruimte zijn uitgerust met ultraviolette lampen. De ultraviolette lampen in de steriele ruimte bevinden zich op 1 meter afstand van het werkoppervlak. Personeel dat de steriele ruimte betreedt, moet steriele kleding en mutsen dragen.
Steriele ruimtes bevinden zich tegenwoordig vooral in microbiologische laboratoria, terwijl algemene laboratoria gebruikmaken van clean benches. De belangrijkste functie van een clean bench is het gebruik van een laminaire luchtstroominstallatie om diverse kleine stofdeeltjes, waaronder micro-organismen, van het werkoppervlak te verwijderen. Het elektrische systeem laat lucht door een HEPA-filter stromen voordat deze het werkoppervlak bereikt, waardoor het werkoppervlak continu wordt blootgesteld aan steriele lucht. Bovendien is er aan de buitenzijde een hogesnelheidsluchtgordijn geplaatst om te voorkomen dat bacteriële lucht van buitenaf binnendringt.
Op plaatsen met moeilijke omstandigheden kunnen houten steriele dozen ook worden gebruikt in plaats van een cleanroom. De steriele doos heeft een eenvoudige structuur en is gemakkelijk te verplaatsen. Aan de voorkant van de doos bevinden zich twee openingen die, wanneer niet in gebruik, worden afgesloten met schuifdeuren. Tijdens de werkzaamheden kunt u uw armen erin steken. De bovenkant van de voorkant is voorzien van glas om de interne werkzaamheden te vergemakkelijken. In de doos bevindt zich een ultravioletlamp en instrumenten en bacteriën kunnen via een klein deurtje aan de zijkant worden ingebracht.
Aseptische werkmethoden spelen tegenwoordig niet alleen een cruciale rol in microbiologisch onderzoek en toepassingen, maar worden ook veelvuldig gebruikt in diverse biotechnologieën. Denk bijvoorbeeld aan transgenetische technologie en monoklonale antilichaamtechnologie.
Geplaatst op: 06-03-2024